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pcr清潔試劑盒反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間(預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性，因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度，進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時，時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
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